一、药物合成 迪士尼彩乐园lll
除非另有讲解，统共反应均在惰性气体氛围（氮气或氩气）下，使用经烘箱干燥（160°C）的玻璃仪器并磁力搅动进行。用于鬈曲试剂和溶剂的打针器在使用前用氮气吹扫。低温反应在装有相宜冷却剂（举例水/冰（0°C））的杜瓦瓶中进行。加热使用热油浴进行。除非另有讲解，产率指的是光谱纯化合物。
反应溶剂购自Acros Organics，为经分子筛干燥的“超干”溶剂，并在惰性气体氛围下操作。四氢呋喃（THF）在使用前从钠/二苯甲酮中蒸馏得到。二氯甲烷（DCM）、三乙胺（TEA）和二异丙基乙胺（DIPEA）从氢化钙中蒸馏得到。酒精和乙酸购自买卖供应商，告成使用。用于萃取和快速柱色谱的溶剂以工业级纯度购买，并在使用前在旋转挥发仪上减压蒸馏。统共其他试剂和溶剂均购自买卖供应商并告成使用。
反应和色谱馏分通过默克集团（Merck KGaA）的硅胶F254薄层色谱（TLC）进行定性监测。分析物通过紫外光照耀和/或通过将TLC板浸入茚三酮或高锰酸钾溶液中，然后用炎风枪加热来显色。快速柱色谱给与默克集团（Merck KGaA）的Geduran® Si60（40 - 63μm）硅胶进行（洗脱剂在括号中给出）。反相柱色谱以沃特世（Waters）C18（C18；55 - 105μm，125Å）为固定相进行（洗脱剂在括号中给出）。液相色谱 - 质谱（LCMS）在安捷伦1260 Infinity高效液相色谱系统、安捷伦1100系列质谱仪（型号：1946D，类型：SL）上进行，配备安捷伦Zorbax Eclipse Plus C18（100×4.6mm，）
张开剩余92%粒径为3.5微米）的反相柱，流速恒定为1毫升/分钟，在10分钟内给与10 → 100%乙腈/水 + 0.1%甲酸的梯度。
核磁共振（NMR）谱在瓦里安（Varian）400兆赫的布鲁克（Bruker）AVIII HD（低温探头）上测量质子核（碳核为100兆赫）。氢核磁共振（¹H NMR）位移以相关于四甲基硅烷化学位移的百万分比（ppm）解说。¹H和¹³C NMR位移凭据残留溶剂信号进行校准：二甲基亚砜（DMSO）（2.50 ppm/39.5 ppm）。¹H NMR光谱数据解说如下：以ppm为单元的化学位移（多重性、耦合常数（Hz）、积分）。多重性缩写如下：s（单峰）、d（双峰）、t（三重峰）、q（四重峰）和m（多重峰），按不雅测收尾解说。除多重峰外，统共信号的化学位移均解说为共振限制的中心值。此外，除了¹H和¹³C NMR测量外，还使用同核干系光谱（COSY）、异核单量子相关（HSQC）和异核多键相关（HMBC）等二维NMR本事来缓助信号包摄。统共原始目田感应衰减（fid）文献均经过惩处，光谱使用Mestrelab Research S.L.公司的MestReNova 11.0情势进行分析。
统共高分辨率质谱（HRMS）均由慕尼黑大学（LMU）质谱办事中心纪录。HRMS在赛默飞世尔（Thermo Finnigan）有限公司的MAT 90上给与电喷雾电离（ESI）纪录，或者在日本电子（Jeol）有限公司的MAT 90上给与电子电离（EI）纪录。
紫外 - 可见（UV/Vis）光谱在瓦里安（Varian）Cary 50扫描紫外 - 可见光谱仪上使用赫尔马（Helma）SUPRASIL精密比色皿（光程10毫米）纪录。统共化合物储备溶液均在台式明后下，于二甲基亚砜（DMSO）中制备成50毫摩尔浓度，然后在最终溶剂（DMSO或磷酸盐缓冲生理盐水（PBS））中稀释至50微摩尔浓度。光鬈曲通过多色光（Polychrome V，Till Photonics）单色仪或普里兹马蒂克斯（Prizmatix）超高功率发光二极管（460纳米）完结，它们陆续到光纤电缆，通过该电缆从顶部对分光光度计中的样品进行照耀。
(2R,3R,4S,5R) - 2 - (6 - 氨基 - 2 - ((4 - 氨基苯乙基)氨基) - 9H - 嘌呤 - 9 - 基) - 5 - (羟甲基)四氢呋喃 - 3,4 - 二醇（3）2 - 碘腺苷（1）（150毫克，0.382毫摩尔，1.0当量）悬浮于纯氨基苯乙胺（2）（251微升，1.91毫摩尔，5.0当量）中，并在氩腻烦围下加热至110°C。在好像70°C时变为均相后，羼杂物在110°C下搅动3小时。反应羼杂物冷却至室温，溶于甲醇，并使用硅胶柱色谱法（10%甲醇/二氯甲烷）纯化。得到3为灰白色泡沫状物资（150毫克，0.374毫摩尔，产率98%）。
¹H NMR（400兆赫，DMSO - d₆）：δ = 7.90（单峰，1H），6.90（双峰，J = 8.1赫兹，2H），6.73（单峰，2H），6.49（双峰，J = 8.1赫兹，2H），6.03（三重峰，J = 5.4赫兹，1H），5.73（双峰，J = 6.0赫兹，1H），5.37（双峰，J = 6.1赫兹，1H），5.13（单峰，1H），5.10（双峰，J = 4.6赫兹，1H），4.82（单峰，2H），4.62（单峰，1H），4.17 - 4.06（多重峰，2H），3.89（双峰，J = 3.5赫兹，1H），3.68 - 3.59（多重峰，1H），3.58 - 3.50（多重峰，1H），2.64（三重峰，J = 7.3赫兹，2H）。
¹³C NMR（100兆赫，DMSO - d₆）：δ = 159.2，156.0，151.5，146.6，136.4，129.1，126.9，114.0，113.6，87.2，85.3，72.9，70.7，61.8，43.4，34.7。
注：¹H和¹³C涌现残留甲醇的信号。
HRMS（ESI）计较值为C₁₈H₂₄N₇O₄ [M + H]⁺：402.1884；实测值：402.1881。
Rf = 0.2（10%甲醇/二氯甲烷）
偶氮腺苷 - 1（AA - 1）
3（60毫克，0.149毫摩尔，1.0当量）和亚硝基苯（4）（40.0毫克，0.347毫摩尔，2.5当量）溶于二氯甲烷（2毫升），加入乙酸（200微升，0.349毫摩尔，23.0当量）。反应羼杂物搅动过夜，并用碳酸氢钠中庸。分离各相，有机相用碳酸氢钠洗涤，水相用乙酸乙酯（3次）萃取，归并的有机层用硫酸钠干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶柱色谱法（10%甲醇/二氯甲烷）纯化，得到AA - 1（58.0毫克，0.118毫摩尔，产率80%）为橙色固体。
¹H NMR（400兆赫，DMSO - d₆）：δ = 7.92（单峰，1H），7.86（双双重峰，J = 15.5，8.0赫兹，4H），7.59（四重峰，J = 9.6，8.6赫兹，3H），7.50（双峰，J = 8.0赫兹，2H），6.77（单峰，2H），6.31（单峰，1H），5.76（双峰，J = 5.9赫兹，1H），5.39（双峰，J = 5.8赫兹，1H），5.13（双峰，J = 4.1赫兹，2H），4.64（单峰，1H），4.15（单峰，1H），3.91（双峰，J = 3.4赫兹，1H），3.69 - 3.59（多重峰，1H），3.59 - 3.46（多重峰，3H），2.95（三重峰，J = 7.1赫兹，2H）。
¹³C NMR（100兆赫，DMSO - d₆）：δ = 159.7，156.5，152.4，151.9，150.8，144.9，136.9，131.8，130.3，129.9，123.1，122.9，114.2，87.6，85.7，73.4，71.1，62.3，43.1，35.7。
HRMS（ESI）计较值为C₂₄H₂₆N₈O₄ [M + H]⁺：491.2150；实测值：491.2147。
Rf = 0.7（20%甲醇/二氯甲烷）。
λmax（DMSO）：292纳米，328纳米（π → π*）。
偶氮腺苷 - 2（AA - 2）
氨基联苯（189毫克，1.12毫摩尔，4.5当量）溶于二氯甲烷（5毫升）和水（10毫升）。将过硫酸氢钾（Oxone，689毫克，1.12毫摩尔，4.5当量）的水溶液（5毫升）逐渐加入到该溶液中。剧烈搅动过夜后，反应羼杂物用乙酸乙酯稀释。有机层用1M盐酸、1M氢氧化钠和富饶氯化钠洗涤，并用硫酸钠干燥。减压撤除溶剂后，粗制的亚硝基芳烃不经进一步纯化告成当作二氯甲烷溶液使用。向该溶液中加入3（100毫克，0.249毫摩尔，1.0当量）和乙酸（75.0毫克，1.25毫摩尔，71.0微升，5.0当量）并搅动23小时。反应羼杂物用1M氢氧化钠（2次）、富饶氯化钠中庸洗涤并经硫酸钠干燥。使用硅胶快速柱色谱法（SiO₂，5% → 50%甲醇/二氯甲烷）纯化，接着用反相柱色谱法（40%乙腈/水）纯化，得到AA - 2（34.0毫克，60.1微摩尔，产率24%）为棕色固体。
¹H NMR（400兆赫，DMSO - d₆）：δ = 7.98（双峰，J = 8.7赫兹，2H），7.93（单峰，1H），7.90（双峰，J = 8.7赫兹，2H），7.86（双峰，J = 8.4赫兹，2H），7.78（双峰，J = 7.2赫兹，2H），7.51（三重峰，J = 7.6赫兹，4H），7.46 - 7.40（多重峰，1H），6.77（单峰，2H），6.31（三重峰，J = 5.6赫兹，1H），5.77（双峰，J = 6.0赫兹，彩乐园官网CLY03.vip1H），5.21（单峰，2H），4.65（单峰，1H），4.19 - 4.14（多重峰，1H），3.92（四重峰，J = 3.9赫兹，1H），3.66（双双重峰，J = 11.9，4.0赫兹，1H），3.60 - 3.48（多重峰，3H），2.96（三重峰，J = 7.1赫兹，2H）。
¹³C NMR（100兆赫，DMSO - d₆）：δ = 159.2，156.1，151.5，151.1，150.5，144.4，142.8，139.0，129.1，128.2，127.7，126.9，123.2，122.7，113.7，87.2，85.3，73.0，70.7，61.8，42.7，35.3。
HRMS：（ESI）计较值为C₃₀H₃₀N₈O₄ [M + H]⁺：567.2390；实测值：567.2459。
Rf = 0.4（10%甲醇/二氯甲烷）。
λmax（DMSO）：355纳米（π → π*）。
偶氮腺苷 - 3（AA - 3）
3（100毫克，0.249毫摩尔，1.0当量）溶于甲醇/水（50毫升，1:1），冷却至0°C，加入1M盐酸水溶液（747微升，0.747毫摩尔，3.0当量）。将亚硝酸钠溶于水（0.5毫升）并滴加到搅动的苯胺溶液中。反应羼杂物搅动30分钟，所得重氮盐溶液滴加到预冷（0°C）的二甲基苯胺（6）（47.7微升，45.3毫克，0.374毫摩尔，1.5当量）和乙酸钠（123毫克，1.49毫摩尔，6.0当量）的甲醇羼杂物中。将所得溶液逐渐升温至室温并搅动3小时。加入乙酸乙酯（110毫升），大部分甲醇在减压下撤除。有机相用富饶碳酸氢钠和富饶氯化钠洗涤，并经硫酸镁干燥。真空撤除溶剂，粗产物通过硅胶柱色谱法（10%甲醇/二氯甲烷）纯化，得到AA - 3（80.0毫克，0.249毫摩尔，产率60%）为橙色固体。
¹H NMR（400兆赫，二甲基亚砜 - d₆）：δ = 7.90（单峰，1H，CH），7.75（双峰，J = 8.7赫兹，2H，CH₂），7.69（双峰，J = 7.9赫兹，2H，CH₂），7.38（双峰，J = 8.0赫兹，2H，CH₂），6.85 - 6.69（多重峰，4H，NH₂和CH₂），6.28（单峰，1H，OH），5.73（双峰，J = 5.9赫兹，1H，CH），5.38（双峰，J = 6.1赫兹，1H，OH），5.12（双峰，J = 4.6赫兹，2H，OH，与1H，NH重迭），4.61（单峰，1H，CH），4.16 - 4.08（多重峰，1H，CH），3.88（双峰，J = 3.4赫兹，1H，CH），3.61（双三重峰，J = 8.7，4.3赫兹，1H，1/2 CH₂），3.55 - 3.42（多重峰，3H，1/2 CH₂和CH₂），3.02（单峰，6H，2个CH₃），2.88（三重峰，J = 7.1赫兹，2H，CH₂）。
¹³C NMR（100兆赫，二甲基亚砜 - d₆）：δ = 159.2，156.1，152.4，151.5，150.8，142.6，142.2，136.5，129.6，124.6，121.9，113.7，111.6，87.2，85.3，72.9，70.7，61.8，42.8，39.7（从HSQC得回），35.2。
HRMS（ESI）：计较值为C₂₆H₃₂N₉O₄ [M + H]⁺：534.2572；实测值：534.2572。
保留时期（Rt）：2.866分钟（5 → 100%乙腈/水 + 0.1%甲酸）
λmax（二甲基亚砜）：422纳米（π → π*）
二、情势
2.1 反式/顺式比例的测定
制备浓度为5毫摩尔的核磁共振（NMR）样品，用锡纸包裹，将喷砂惩处过的玻璃纤维调整至样品溶液中距核磁共振管底部1厘米的正确高度。将样品放入200兆赫的核磁共振仪中，测量测试光谱以确保不会扰乱测量。收罗¹H NMR信号，在第一个小时内每5 - 10分钟收罗一次，之后每小时收罗一次（共收罗12 - 14小时）。关于AA - 1和AA - 2，在收罗完第一个¹H - 光谱后立即开启光照，并在实验进程中执续光照。关于红移繁衍物，在核磁共振仪里面进行光照是不施行的。将样品在核磁共振仪外进行光照，并外推得到光褂讪态（PSS）的最大顺式含量。为收罗暗弛豫数据，关闭光照，将样品留在核磁共振仪中，在0.5 - 14小时内每小时纪录一次光谱。对相应的反式温存式信号进行积分并计较百分比。
2.2 腺苷脱氨酶活性
如先前所述，在25°C下，以0.1毫摩尔腺苷当作参考底物，在50毫摩尔pH值为7.4的三羟甲基氨基甲烷 - 盐酸（Tris - HCl）缓冲液中测定腺苷脱氨酶（ADA，EC 3.5.4.4）的活性。使用格雷纳（Greiner）UV - Star® 96孔板，在POLARstar酶标仪中监测由腺苷脱氨作用导致的265纳米处吸光度的裁减（Δε = 7800 M⁻¹cm⁻¹）。在50毫摩尔Tris - HCl缓冲液（pH值为7.4）中，使用0.1毫摩尔腺苷和偶氮 - 腺苷3以及恒定的酶浓度（0.02 U/毫升）进行稳态能源学测量。
2.3 动物
使用来自巴塞罗那大学动物设施、体重为20 - 25克的成年雄性和雌性CD - 1小鼠。巴塞罗那大学动物使用和照管委员会批准了该决策（编号：10034）。按照批准的实验决策，每天对统共动物进行不雅察，以评估诊疗时期的不良反应迹象。对该决策的回来性分析标明不需要给与矫正程序（即使用镇痛药）。按照《实验动物照管和使用指南》[5]提供的准则以及欧盟教导（2010/63/EU）饲养和测试动物。小鼠以每笼五只的数目饲养在程序笼中，可目田得回食品和水，并督察在非回转的12小时晦暗/光照周期（上昼7:30脱手光照期）、22°C温度和66%湿度（程序要求）下。统共动物实验均在上昼9:00至下昼6:00之间由对药物惩处不知情的顾问东谈主员进行。
2.4 旷场实验
旷场安设由一个38×38×38厘米的箱体构成，如先前所述，将小鼠置于面向墙壁的旯旮，并用录像机纪录其10分钟内的水平畅通行径。
福尔马林难堪动物模子。按照先前所述[7]进行福尔马林难堪动物模子实验。简要隘说，每组n = 6 - 8只小鼠，在向小鼠右后爪跖面中部打针稀释的福尔马林溶液（20微升2.5%福尔马林/0.92%甲醛；）之前15分钟，离别给以足底（i.pl.）打针10微升溶媒（20%二甲基亚砜 + 20%吐温 - 80的生理盐水溶液）、ADO（5毫摩尔/50纳摩尔）或AA - 3（5毫摩尔/50纳摩尔）。如先前所述[8]，福尔马林教导的在光照或模拟操作（晦暗）要求下的伤害感受行径通过打针福尔马林后30分钟内舔舐或咬打针爪的时期来量化。启动急性期（0 - 5分钟；I期）反馈急性外周难堪，随后是相对较短的静止期（10分钟），接着是延迟的反应期（15 - 30分钟；II期），这与核心伤害性致敏的发展讨论。关于AA - 3的外周光为止，在纪录每个阶段（I期15分钟和II期10分钟）之前，用基于发光二极管（LED）的光纤系统（多丽克镜头公司（Doric Lenses Inc.））以405纳米光（或晦暗）告成照耀后爪。凭据先前的实验采用现时的时常期隔，这些实验标明小于15分钟的周期内光为止可靠进程并非最优（数据未涌现）。405纳米光脉冲每次执续500毫秒，以1赫兹频率辐射，输出功率为23毫瓦，强度为2000毫安。不同惩处教导的镇痛作用通过以下公式计较：在制备DNA模板时，若何确保DNA片断的齐全性NMR实验中，若何调度溶液的pH值若何计较DNA片断的Kd值,镇痛后果（%）= [（溶媒惩处动物的舔舐/咬啮时期 - 药物惩处动物的舔舐/咬啮时期）/溶媒惩处动物的舔舐/咬啮时期]×100。其中，LTV和LTD离别代表溶媒惩处动物和药物惩处动物的舔舐/咬啮时期。
东莞富临医疗科技有限公司是 Doric Lenses 亚洲代理商，为亚洲客户供应 Doric Lenses 电生理居品与配套居品。
从营养成分上来看，栗子中的淀粉含量非常高。淀粉是一种多糖，主要由葡萄糖分子构成。当我们食用热栗子时，其内部的淀粉会被充分糊化，变得容易被人体的消化酶分解，从而被吸收利用。相反，如果吃凉栗子，其中的淀粉会部分回生，变得难以消化。这些未被完全糊化的淀粉颗粒可能会穿过小肠，进入大肠，在那里成为细菌的食物，产生大量的气体，导致腹胀等不适症状。
2.5 统计学
数据以平均值±平均程序弊端（SEM）走漏。每个实验要求下的样本/动物数目（n）在相应的图例中注明。通过夏皮罗 - 威尔克（Shapiro - Wilk）正态性测验评估数据的正态性。通过格拉布斯（Grubbs）测验评估相配值；莫得动物被排斥。使用GraphPad Prism 6.01（好意思国加利福尼亚州圣地亚哥），按照教导，通过学生t测验、带有邓尼特（Dunnett）过后测验的未婚分方差分析或者通过带有邦费罗尼（Bonferroni）过后测验的双身分方差分析进行实验组之间的相比。当P < 0.05时觉得存在统计学各异。
三、数据分析
图 S1.光稳态 （PSS） 的测定。a） 默示图使用玻璃纤维和光源的 NMR，通过 NMR 详情光稳态。b） 通过 NMR 测定统共三种 Azo 腺苷的 PSS。环境光：在环境光要求下制备 NMR 样品后，在测量前将样品包裹在锡箔中。照明：12-14 小时。照明：12-14 小时。暗弛豫：无照明。：12 h， ：14h， c：关于红移导数，NMR 里面的照明是不切实质的。在 NMR 以外对样品进行辐照，并估计 PSS 的最大顺式含量。：30 分钟 c） 1H-NMR （200 MHz） 切口，涌现随时期推移的反式到顺式异构化。
图 S2.腺苷脱氨酶活性的时期进度。腺苷脱氨酶 （ADA，0.02 U/mL） 活性通过测量载体 （Veh）、腺苷 （ADO，100 mM） 或 AA-3 （100 mM） 随时期脱氨引起的 265 nm 吸光度裁减来详情。
图 S3.AA-3 教导畅通活性。通过量化小鼠 （n=5） 全身 （ip） 用载体（生理盐水）、腺苷（ADO，10 mg/kg）或 AzoAdenosine-3（AA-3,10 mg/kg）全身 （i.p.） 给药的总距离来评估畅通活性 10 分钟。*P<0.05 和 ***P < 0.001，单向方差分析与 Dunnett 多重相比测试，使用 Veh 当作对照。
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